Uobičajena pitanja i odgovori u pripremi rastvora gvanidin tiocijanata

Гуанидин тиоцијанат је снажан протеински денатурант. Не само да може брзо растворити протеине, довести до фрагментације ћелијске структуре и брзо одвојити нуклеарне протеине од нуклеинских киселина због уништења секундарне структуре, већ такође има снажан денатурацијски ефекат на РНазе. Због тога се гванидин тиоцијанат може користити као денатурант за лизу ћелија, одвајање РНК од протеина и ослобађање РНК у раствор. Међутим, неки проблеми се често појављују у припреми и употреби раствора гванидин тиоцијаната. Овај рад ће одговорити на ове проблеме један по један.

Да ли сада треба користити и припремити раствор гванидин тиоцијаната?

Коначна концентрација гванидин тиоцијаната била је 4 м као пример: 42 мм натријум цитрата, 0,83% н-лаурил саркозина (натријум додецил, н-метилглицин), 0,2 мм ²²-Припрема ЦСБ пуфера из меркаптоетанола; 25 г гванидин тиоцијаната и 33 мл раствора ЦСБ пуфера се мешају док се потпуно не раствори. Денатурисани раствор се може припремити загревањем и растварањем на 65 ° Ц℃ i čuva se na 4℃ за стање приправности.

Dakle, rastvor gvanidin tiocijanata ne mora da se koristi i priprema sada, a trenutno na tržištu postoje rastvori različitih koncentracija, ali vreme skladištenja nije lako predugo, inače će doći do padavina koje je potrebno pažljivo proveren pre upotrebe; Pored toga, ako ima previše jednokratne pripreme, preporučuje se prepakivanje.

Да ли је након припреме раствор гванидин тиоцијаната потребна стерилизација?

Nije potrebno sterilisati rastvor gvanidin tiocijanata, koji nije veoma stabilan, a 0,1% DEPC voda se uglavnom koristi sa rastvorom za pirolizu, a voda je sterilisana. Pored toga, sve reagense za ekstrakciju RNK potrebno je pripremiti sa DEPC vodom, a reagens treba novo otvoriti i koristiti isključivo za RNK.

Iako pripremljeni lizat ne treba da se steriliše, treba napomenuti da su plastični proizvodi korišćeni u eksperimentu označeni bez RNase. Ako nisu otvoreni za upotrebu, mogu se direktno koristiti. Ostale se moraju tretirati: dodati DEPC u duplo destilovanu vodu da bi njegova konačna koncentracija bila 0,1%, potopiti plastične proizvode u nju, provetriti kuhinju preko noći, a zatim ih zatvoriti aluminijumskom folijom, sterilizacija na visokoj temperaturi i visokim pritiskom najmanje 30 minuta, suvi i pripravni.